MET 14外顯子跳讀突變的臨床意義及檢測方法

　　近年來，MET基因異常逐漸成為非小細胞肺癌（NSCLC）中非常具有潛力的驅動基因，其中MET第14號外顯子跳讀突變（MET 14跳突）是目前臨床研究中最重要的治療靶點。NSCLC患者中MET 14跳突的發生率為0.9%～4.0%，并且多個MET抑制劑針對MET 14跳突的晚期NSCLC患者具有較好的療效。2021年，MET抑制劑在中國獲批，用于攜帶MET 14跳突的局部晚期或轉移性NSCLC，為這部分患者的治療提供了新的方案。近日《非小細胞肺癌MET臨床檢測中國專家共識》正式發布，其中對MET 14跳突的臨床意義和檢測方法進行了全面的解讀。

MET 14外顯子跳突的臨床意義

　　MET基因編碼的MET蛋白是一種跨膜酪氨酸激酶受體，與配體結合后能激活下游的一系列信號通路，可以促進細胞的增殖、遷移和血管生成等過程。在正常組織中，MET蛋白可通過CBL E3連接酶介導的泛素化降解而進行負向調控，其中MET基因第14號外顯子編碼的近膜結構域具有CBL結合位點（Y1003），是MET蛋白負向調控的重要區域。在腫瘤中，MET 14跳讀突變會造成MET蛋白近膜結構域缺失、Y1003位置氨基酸改變或缺失等，導致MET穩定性增加和降解減少，從而引起下游信號的持續激活，最終促進腫瘤的發生和發展。

　　MET 14跳突通常發生在老年患者，肺腺癌中的發生率（約3%）高于肺鱗癌患者（1%～2%），其中肉瘤樣癌的發生率更高（5%～32%）。攜帶MET 14跳突的NSCLC患者在未使用MET抑制劑時，通常表現為腫瘤高侵襲性、抗腫瘤治療的耐藥性和不良的預后。目前，多個臨床研究顯示，MET抑制劑在MET 14跳突晚期NSCLC患者中具有了良好的抗腫瘤活性以及安全性。國家藥品監督管理局（NMPA）在2021年6月批準賽沃替尼上市，為國內首個用于治療接受含鉑化療后疾病進展或無法耐受標準含鉑化療的MET 14跳突的局部晚期或轉移性NSCLC成人患者的高選擇性MET抑制劑。

MET 14外顯子跳突的檢測方法

　　MET 14跳讀突變主要發生區域包括分支位點（單核苷酸）區域、多嘧啶區域（16個核苷酸）、剪接受體位點（上游2個核苷酸）以及剪接供體位點（下游2個核苷酸）等。當以上區域發生突變時，將導致mRNA異常剪接， MET第14號外顯子區域丟失，第13與15號外顯子發生融合。由此可見，MET 14跳突常見的突變位點分布區域較廣，且突變形式多樣，給臨床檢測和判讀帶來巨大挑戰。目前MET 14跳突的檢測方法主要包括RT-qPCR、DNA和RNA二代測序等，不同檢測方法各有其優缺點，必要時可相互驗證或補充（表1）。

　　RT-qPCR是以RNA為檢測對象，在MET第13和第15號外顯子區域設計引物，檢測是否有特異性的擴增產物。該方法檢測MET 14跳突準確率高，但對于一些與MET 14跳突功能相似的、特殊且罕見的MET變異形式（如Y1003位點氨基酸改變或缺失）會導致漏檢。對于檢測結果在陽性閾值附近的患者，其結果解釋需謹慎，應結合樣本質量、腫瘤細胞含量以及檢測質控情況綜合分析，必要時可使用其他平臺進行復測。

　　DNA二代測序首選腫瘤組織樣本或細胞學樣本進行檢測，目前試劑盒主要基于擴增子法和雜交捕獲法2種建庫方法來富集MET 14跳突相關區域片段以進行基因序列檢測?？紤]到導致MET 14跳突的變異位點和形式多樣性，不同建庫方法的檢測能力也有一定差別，推薦建庫的靶向序列至少應覆蓋全部MET 13內含子、MET 14外顯子以及MET 14外顯子下游50 bp的范圍（MET 14內含子內）。二代測序生物信息分析的數據庫應盡可能包含全面的MET 14跳突位點信息，并定期更新。對于檢測到的疑似MET 14跳突，在生物信息分析預測的基礎上，建議輔以RT-qPCR或RNA測序驗證。當腫瘤組織樣本和細胞學樣本不可及時，可考慮液體活檢樣本進行DNA二代測序檢測，但ctDNA在腫瘤患者體內含量較低，對檢測方法靈敏度的要求較高，可能存在假陰性，需要引起注意。

　　RNA二代測序是在RNA水平上檢測MET第13/15號外顯子融合來判斷是否發生MET 14跳突。該方法直接檢測MET 14跳突，檢測覆蓋范圍明確，生物信息分析簡單。尤其當患者發生影響剪接的非典型內含子突變時，該方法有助于識別MET 14 跳突。但與RT-qPCR一樣，對于一些罕見的MET變異形式可能會出現漏檢。
 

參考文獻：《非小細胞肺癌MET臨床檢測中國專家共識》.中華病理學雜志,2022,51(11):1094-1103.